问答题

简答题 提高PCR反应的特异性一般可以使用哪几种方法?

【参考答案】

A.引物设计:引物长度、碱基配对是否严格、GC%含量、退火温度、引物浓度与纯度、稳定性、是否为简并性引物等;
B.使用热启动:在变性完成之后再加入DNA聚合酶(或聚合酶才有活性),这样可以提高特异性,因为DNA聚合酶在低温时也有活性,可能引起非特异的扩增;
C.镁离子浓度:不同的模板和引物有不同的镁离子浓度,应进行预实验进行探索;较高的镁离子浓度会提高产量,同时降低特异性;dNTP浓度较高时应适当提高镁离子浓度;
D.促进PCR的添加剂:降低DNA熔解温度,从而有助...

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