问答题

简答题 PCR反应一般分为几个步骤?各步骤有什么特点?

【参考答案】

A.变性:双链DNA变成单链DNA。变性温度的高低由G+C含量决定;变性时间由DNA链长度决定。常规PCR变性条件为94~95度45s。
B.退火,将温度下降至适宜温度,使引物与模板DNA退火结合;退火是使引物和模板DNA复性。复性过程采取的温度(Ta)至关重要。复性温度过高,引物不能与模板很好地复性,扩增效率很低;复性温度太低,引物将产生非特异性复性,导致非特异性的DNA片段的扩增。退火温度通常在比理论计算的引物和模板的熔解温度低3~5℃的条件下进行。
C.延伸:寡核苷酸引...

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