什么是蛋白质的一级结构?测定蛋白质一级结构的一般步骤是什么?

【参考答案】

蛋白质的一级结构是指蛋白质分子中氨基酸残基的排列顺序，包括二硫键的位置。
一般的测定步骤是：
(1)测定蛋白质分子中多肽链的数目。根据蛋白质N—末端或C—末端残基的摩尔数和蛋白质的分子量可以确定蛋白质分子中多肽链的数目。
(2)拆分蛋白质分子的多肽链。如果蛋白质分子是由几条不同的多肽链构成的，则必须设法将这些多肽链拆开并单独分离出来。
(3)断裂多肽链内的二硫桥。
(4)分析每一条多肽链的氨基酸组成。经分离、纯化的多肽链一部分样品进行完全水解，测定它的氨基酸组成。
(5)测定多肽链的N—末端和C—末端的氨基酸。
(6)用两种或两种以上的断裂方法，将多肽链断裂成两套或多套小的肽段。
(7)分离并测定各个小肽的氨基酸顺序。
(8)将两套或几套肽段的氨基酸顺序进行跨切口重叠，比较分析，推断出蛋白质分子中的全部氨基酸排列顺序。
(9)确定原多肽链中二硫键的位置。