问答题

酶纯化试验中,通常先用(NH42SO4作为分级沉淀剂,在用SephadexG-25凝胶柱层析法从沉淀酶液中除去(NH42SO4。请问:

【参考答案】

(1)与其他中性盐沉淀剂相比,用(NH<sub>4</sub>)<sub>2</sub>SO<sub>4</sub>做沉淀剂有何有点?
(2)如发现柱层析后酶的总活性较纯化前明显提高,可能的原因是什么?
(3)柱层析时,湿法装柱的注意事项主要有哪些?
(1)硫酸铵具有溶解度大、温度系数小、对酶活力影响小和利于分离等优点。
(2)纯化前酶液中可能含有酶抑制剂。
(3)注意事项:
①层析柱应于水平面垂直。
②柱床体积至少是上样体积的3倍以上。
③层析介质中不能出现气泡和断层。
④柱床表面要平整,并保有一定的水位。

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